產(chǎn)品信息 二、HRM專(zhuān)用熒光染料 —— LyGreen 高分辨率熔解曲線(xiàn)(high-resolution melting，HRM)是一種基于單核苷酸熔解溫度不同而形成不同形態(tài)熔解曲線(xiàn)的基因分析新技術(shù)，具有*的敏感性，可以檢測出單個(gè)堿基的差異，并且成本低、通量高、速度快、結果準確、不受檢測位點(diǎn)的局限，實(shí)現了真正的閉管操作。在突變掃描、單核苷酸多態(tài)性分析、甲基化研究、基因分型、序列匹配等方面HRM分析技術(shù)發(fā)揮著(zhù)重要作用。 HRM分析的一個(gè)必要條件是飽和染料，勝任這一任務(wù)的染料僅有：LC Green,SYTO 9, LyGreen等幾個(gè)產(chǎn)品。 LyGreen™飽和核酸染料是一種新型的的雙鏈DNA結合飽和熒光染料，是新一代用于HRM分析的熒光染料，也可用于實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）。該染料結構上由兩個(gè)單體染料分子通過(guò)一個(gè)彈性臂連接成一個(gè)二聚體，在沒(méi)有dsDNA存在時(shí)，該結構呈無(wú)熒光環(huán)狀結構，一旦有dsDNA出現，則恢復隨機形態(tài)并與dsDNA結合發(fā)出強烈的綠色熒光。 與其他熒光染料如SYBR Green I 相比，LyGreen具有如下突出優(yōu)點(diǎn)： 1）高靈敏度：在推薦濃度下使用時(shí)可以獲得比SYBR Green I 更強的信號。 2）準確：飽和結合雙鏈DNA全部小溝位置，變形時(shí)染料不遷移，熒光信號準確反映雙鏈DNA變化情況；過(guò)量染料形成二聚體，而不游離，使得LyGreen對PCR的抑制遠小于SYBR Green I，因此，使用LyGreen進(jìn)行的qPCR實(shí)驗可以使用快速PCR步驟。 3）高穩定性：在正常的儲存、操作和PCR過(guò)程中不會(huì )被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里，也可以反復凍融。 4）安全性好：細胞膜穿透性測試表明，LyGreen幾乎不能穿透細胞膜，安全性高。 5）兼容性：和SYBR Green I 光譜相似，使用不同品牌qPCR儀器時(shí)不許改變光譜元件設置，也無(wú)需改變操作步驟，qPCR完成后，無(wú)需加入其它核酸染料便能直接在凝膠成像系統下觀(guān)察分析。 6）重復性好（如圖2.）：特殊設計染料，相同反應體系下，熒光信號釋放僅與雙鏈濃度有關(guān)，線(xiàn)性。 圖2.： LyGreen染料用于綿羊FecB基因HRM分析. HRM分析設備為L(cháng)ightCycler@480熒光定量PCR儀(德國羅氏)
產(chǎn)品信息 三、PikoGreen——一種極為靈敏的雙鏈DNA定量熒光染料。 對微量的雙鏈 DNA 進(jìn)行定量在各種生物學(xué)應用中都顯得非常重要,例如 cDNA 文庫的構建；用于亞克隆的 DNA 片段的純化；定量 DNA 擴增產(chǎn)物,在藥物中DNA 分子殘留的測定等 。 Picogreen染料是一種dsDNA定量熒光染料，基本不受ssDNA和RNA的影響，并且可以耐受一定濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白等干擾。目前使用Picogreen染料定量檢測DNA已經(jīng)廣泛用于生物學(xué)檢測，并被2010年版《中華人民共和國藥典》選為藥物殘留DNA定量方法。但是價(jià)格貴，貨期長(cháng)，假貨魚(yú)目混珠等在市場(chǎng)上普遍存在。 PikoGreen是李記生物自主研發(fā)的一款新型dsDNA定量熒光染料，其檢測靈敏度高，可檢測到pg級DNA；檢測范圍寬，可跨越４個(gè)數量級；特異性好。在低檢測限，穩定性等方面全面超越PicoGreen, 是PicoGreen的替代產(chǎn)品，價(jià)格僅為PicoGreen的1/2. PikoGreen具有如下突出優(yōu)點(diǎn)： 1）靈敏：數量級較UV吸光讀數更敏感，可節省樣品； 2）特異性強：只結合dsDNA，特異性強，不受樣品常規污染影響。傳統紫外吸光法容易受樣品中存在的單鏈DNA，蛋白，RNA等影響； 3）耐受性好：耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖，可以直接定量PCR擴增產(chǎn)物而無(wú)需從反應混合物中純化DNA。 4）線(xiàn)性范圍寬：PikoGreen dsDNA染料測定DNA濃度，在100pg/ml-100ng/ml范圍內呈良好線(xiàn)性；熒光計兼容。 5）容易使用：在樣品中加入染料，等待5-6分鐘染色，然后讀數即可，且適用于96和384孔板；與大多數基于熒光的酶標儀和可適用于各種DNA樣品分析，PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活性分析、基因組DNA定量以及復雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域。 6）PikoGreen dsDNA檢測dsDNA的線(xiàn)性關(guān)系良好!（見(jiàn)圖3、圖4、圖5） 圖 3.PikoGreen Broad Range dsDNA （Ex/Em 350/460nm）檢測不同類(lèi)型dsDNA，表現出良好線(xiàn)性關(guān)系。 圖 4.分別使用PikoGreen Broad Range dsDNA 和Quant-iT檢測calf thymus DNA，顯示 PikoGreen dsDNA 測得的 DNA 樣本線(xiàn)性關(guān)系更好，且動(dòng)態(tài)測量范圍更廣 圖5. 用PikoGreen Broad Range dsDNA梯度標準calf thymus DNA溶液所做的線(xiàn)性回歸分析。 產(chǎn)品信息
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