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      當前位置:首頁(yè) > 產(chǎn)品中心 > 細胞生物學(xué) > 細胞凋亡 > AC12L072/AC12L073JC-1線(xiàn)粒體膜電位檢測試劑盒

      JC-1線(xiàn)粒體膜電位檢測試劑盒

      簡(jiǎn)要描述:JC-1線(xiàn)粒體膜電位檢測試劑盒操作簡(jiǎn)單快速,可以通過(guò)流式細胞儀,熒光顯微鏡或熒光酶標儀檢測??梢詸z測細胞、組織或純化的線(xiàn)粒體膜電位。在線(xiàn)粒體膜電位較高時(shí),JC-1 聚集在線(xiàn)粒體的基質(zhì)中,形成聚合物,產(chǎn)生紅色熒光;在線(xiàn)粒體膜電位較低時(shí),JC-1不能聚集在線(xiàn)粒體的基質(zhì)中,此時(shí) JC-1 為單體,可以產(chǎn)生綠色熒光。

      • 產(chǎn)品型號:AC12L072/AC12L073
      • 廠(chǎng)商性質(zhì):生產(chǎn)廠(chǎng)家
      • 更新時(shí)間:2024-07-01
      • 訪(fǎng)  問(wèn)  量:991

      詳細介紹

      品牌其他品牌貨號AC12L072/AC12L073
      規格20T供貨周期現貨
      應用領(lǐng)域生物產(chǎn)業(yè)

      產(chǎn)品描述
        線(xiàn)粒體膜電位降低是細胞早期凋亡的一個(gè)標志,它發(fā)生在細胞膜上的磷酯酰絲*酸外翻與caspase水解酶激活之前。當線(xiàn)粒體膜通透性發(fā)生改變時(shí),膜電位會(huì )降低。這種膜電位的改變是由于 Bax二聚體的形成和 Bid, Bak, Bad的激活,從而誘導線(xiàn)粒體膜形成孔隙造成的。當這些促凋亡蛋白被激活時(shí),線(xiàn)粒體同時(shí)也將細胞se su C 釋放到細胞質(zhì)中。
        JC-1 是一種廣泛用于檢測線(xiàn)粒體膜電位△ Ψm的理想熒光探針,它可以檢測細胞、組織或純化的線(xiàn)粒體膜電位。在線(xiàn)粒體膜電位較高時(shí),JC-1 聚集在線(xiàn)粒體的基質(zhì)中,形成聚合物,產(chǎn)生紅色熒光;在線(xiàn)粒體膜電位較低時(shí),JC-1不能聚集在線(xiàn)粒體的基質(zhì)中,此時(shí) JC-1 為單體,可以產(chǎn)生綠色熒光。通過(guò) JC-1 從紅色熒光到綠色熒光的轉變可以很容易地檢測到膜電位的下降,同時(shí)也可以用 JC-1 從紅色熒光到綠色熒光的轉變作為細胞凋亡早期的一個(gè)檢測指標。
        JC-1單體的大激發(fā)波長(cháng)為 510 nm,大發(fā)射波長(cháng)為527 nm;JC-1 聚合物的大激發(fā)波長(cháng)為 585 nm,大發(fā)射波長(cháng)為 590 nm。操作簡(jiǎn)單快速,可以通過(guò)流式細胞儀,熒光顯微鏡或熒光酶標儀檢測。
      訂購信息

      產(chǎn)品名稱(chēng)貨號規格
      JC-1線(xiàn)粒體膜電位檢測試劑盒AC12L07220T
      JC-1線(xiàn)粒體膜電位檢測試劑盒AC12L073100T

      產(chǎn)品組分

      組分20T100T
      A: JC-1,100× in DMSO100 μL500 μL
      B : 10× Assay Bu?er2 mL10 mL
      C: CCCP, 50 mM10 μL50 μL


      保存方法
        組分A、B需4℃避光冷藏,并盡量避免反復凍融,組分C﹣20℃保存。有效期見(jiàn)外包裝。
      光譜特性

      Ex/Em:
      510/527 nm(單體物,綠色);
      585/590 nm(聚合物,紅色)。
      操作步驟

      1.試劑準備
      配制 JC-1 工作液
      按如下方案配置1mL 1×JC-1染色工作液:取10 µL 100×JC-1染色液,加入到890 µL滅菌的diH2O中,渦旋混勻,向上述混合液中加入100 µL 10× Assay Buffer,渦旋混勻,即可得到1×JC-1染色液。
      】:
      1配置體積可同比例擴大或縮小。
      2不建議直接用1×Assay Buffer稀釋100×JC-1染色液,可能會(huì )出現沉淀。
      配制1× Assay Buffer
      用 diH2O 按 10:1 稀釋檢測緩沖液如1 mL 10×assay buffer + 9 mL diH2O)。
      2.流式細胞染色方案
      細胞染色
      開(kāi)始實(shí)驗之前,請確保JC-1和CCCP溶液已恢復至室溫。
      1按實(shí)驗所需,在培養板中接種細胞(懸浮細胞不要超過(guò)106個(gè)/mL)。
      2陽(yáng)性對照組:根據培養基的量加入相應體積50 mM的CCCP溶液(如終濃度為50 μM即1 mL培養基加入1 μL 50 mM的CCCP溶液),37℃孵育20 min。對于特定的細胞,CCCP的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料確定。
      3對于貼壁細胞,染色前先進(jìn)行消化處理,將其制成細胞懸液,0.5 mL裝于離心管中。
      4室溫下400 x g,離心5 min。
      5除去上清。
      6用0.5 mL的 JC-1 工作液重懸細胞。
      7置于37℃細胞培養箱,孵育 15 min。
      8室溫下400 x g,離心 5 min,去除上清。
      9用 2 mL 的 PBS 緩沖液、培養基或1× Assay Buffer重懸細胞,離心去除上清,重復一次。
      10用 0.5 mL的 PBS 、培養基或1× Assay Buffer重懸細胞,用流式細胞儀檢測分析。
      流式細胞儀定量分析
      對于正常細胞,在PE或PI(FL2)通道可以檢測到線(xiàn)粒體內的JC-1紅色聚集物;對于凋亡細胞,在FITC(FL1)通道可以檢測到JC-1綠色單體物。
      3.熒光顯微鏡染色方案
      懸浮細胞染色
      1參照流式細胞儀染色方案,對細胞進(jìn)行染色。
      2用0.3 mL的 PBS或培養基重懸細胞。
      貼壁細胞染色
      1在培養皿或培養板上接種細胞。
      2陽(yáng)性對照組:根據培養基的量加入相應體積50 mM的CCCP溶液(如終濃度為50 μM即1 mL培養基加入1 μL 50 mM的CCCP溶液),37℃孵育20 min。對于特定的細胞,CCCP的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料確定。
      3去除培養基,加入JC-1工作液使其覆蓋細胞表面。
      4置于37℃細胞培養箱,孵育 15 min。  
      5除去染液,用PBS 緩沖液、培養基或1× Assay Buffer清洗一次細胞。
      6用熒光顯微鏡觀(guān)察分析。
      熒光顯微鏡成像
      采用可以同時(shí)檢測熒光素和羅丹明,或者熒光素與Texas Red 的雙通道濾波器熒光顯微鏡觀(guān)察細胞。對于正常細胞,擁有完整的線(xiàn)粒體膜電位,線(xiàn)粒體在590 nm處發(fā)出紅色熒光,細胞質(zhì)發(fā)出綠色熒光;對于凋亡或壞死的細胞,染料以單體形式存在,在530 nm處發(fā)出綠色熒光。
      4.測定熒光相對比率染色方案
      1按照實(shí)驗要求在96孔板中接種細胞。
      2陽(yáng)性對照組:根據培養基的量加入相應體積50 mM的CCCP溶液(如終濃度為50 μM即1 mL培養基加入1 μL 50 mM的CCCP溶液),37℃孵育20 min。對于特定的細胞,CCCP的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料確定。
      3根據熒光顯微鏡細胞染色方案對細胞進(jìn)行染色處理。
      4用熒光酶標儀檢測熒光值(紅色熒光:Ex/Em=550/600 nm;綠色熒光 Ex/Em=485/535 nm)。
      5計算紅綠熒光比值。
      6與正常細胞相比,在凋亡或壞死細胞中,紅綠熒光比值會(huì )降低。
      注意事項

        該產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。




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